Στη βιολογική έρευνα χρησιμοποιούνται συνήθως πολυπεπτίδια με μακρά ακολουθία. Για πεπτίδια με περισσότερα από 60 αμινοξέα στην αλληλουχία, η γονιδιακή έκφραση και η SDS-PAGE χρησιμοποιούνται γενικά για την απόκτηση τους. Ωστόσο, αυτή η μέθοδος διαρκεί πολύ και το τελικό αποτέλεσμα διαχωρισμού προϊόντων δεν είναι καλή.
Προκλήσεις και λύσεις για μακρά πεπτιδική σύνθεση
Στη σύνθεση των μακρών πεπτιδίων, αντιμετωπίζουμε πάντα ένα πρόβλημα, δηλαδή, το στερεοχημικό εμπόδιο της αντίδρασης συμπύκνωσης αυξάνεται με την αύξηση της αλληλουχίας στη σύνθεση και ο χρόνος αντίδρασης πρέπει να ρυθμιστεί για να ολοκληρωθεί η αντίδραση. Ωστόσο, όσο μεγαλύτερος είναι ο χρόνος αντίδρασης, τόσο περισσότερες παρενέργειες παράγονται και σχηματίζεται ένα τμήμα του πεπτιδίου στόχου. Τέτοια υπολείμματα - ανεπαρκείς πεπτιδικές αλυσίδες είναι βασικές ακαθαρσίες που παράγονται σε μακρά πεπτιδική σύνθεση. Επομένως, στη σύνθεση του μακρού πεπτιδίου, το βασικό πρόβλημα που πρέπει να ξεπεράσουμε είναι να διερευνήσουμε τις συνθήκες αντίδρασης υψηλής ποιότητας και τις μεθόδους αντίδρασης, ώστε να καταστεί η αντίδραση συμπύκνωσης αμινοξέων πιο ολοκληρωμένη και πλήρης. Επιπλέον, μειώστε τον χρόνο αντίδρασης, επειδή όσο μεγαλύτερος είναι ο χρόνος αντίδρασης, τόσο πιο ανεξέλεγκτες πλευρικές αντιδράσεις, τόσο πιο πολύπλοκες είναι τα παραπροϊόντα. Επομένως, συνοψίζονται τα ακόλουθα τρία σημεία:
Μπορεί να χρησιμοποιηθεί σύνθεση μικροκυμάτων: Για ορισμένα αμινοξέα που συναντώνται στη διαδικασία σύνθεσης που δεν είναι εύκολο να ενσωματωθούν, μπορεί να χρησιμοποιηθεί σύνθεση μικροκυμάτων. Αυτή η μέθοδος έχει αξιοσημείωτα αποτελέσματα και μειώνει σημαντικά τον χρόνο αντίδρασης και μειώνει το σχηματισμό δύο βασικών υποπροϊόντων.
Μπορεί να χρησιμοποιηθεί η μέθοδος σύνθεσης θραυσμάτων: Όταν ορισμένα πεπτίδια είναι δύσκολο να συντεθούν με μεθόδους κοινής σύνθεσης και δεν είναι εύκολο να καθαριστούν, μπορούμε να υιοθετήσουμε ολόκληρη τη συμπύκνωση αρκετών αμινοξέων σε ένα ορισμένο τμήμα του πεπτιδίου στην αλυσίδα πεπτιδίων στο σύνολό της. Αυτή η μέθοδος μπορεί επίσης να λύσει πολλά προβλήματα στη σύνθεση.
Μπορεί να χρησιμοποιηθεί σύνθεση ακυλοδραζιδίου: Η σύνθεση των πεπτιδίων ακυλοϋδραζιδίου είναι μια μέθοδος σύνθεσης στερεάς φάσης του Ν-τερματικού πεπτιδίου Cys και C-τερματικού πολυπεπτιδικού υδραζιδίου χημική εκλεκτική αντίδραση μεταξύ του σχηματισμού δεσμών αμιδίου για την επίτευξη της μεθόδου σύνδεσης πεπτιδίου. Με βάση τη θέση του Cys στην πεπτιδική αλυσίδα, αυτή η μέθοδος χωρίζει ολόκληρη την αλυσίδα πεπτιδίων σε πολλαπλές αλληλουχίες και τις συνθέτει αντίστοιχα. Τέλος, το πεπτίδιο στόχου λαμβάνεται μέσω αντίδρασης συμπύκνωσης υγρής φάσης. Αυτή η μέθοδος όχι μόνο μειώνει σημαντικά τον χρόνο σύνθεσης του μακρού πεπτιδίου, αλλά επίσης αυξάνει σημαντικά την καθαρότητα του τελικού προϊόντος.
Μακρύς καθαρισμός πεπτιδίων
Η ιδιαιτερότητα των μακρών πεπτιδίων οδηγεί αναπόφευκτα σε σύνθετα συστατικά των ακατέργαστων πεπτιδίων. Ως εκ τούτου, είναι επίσης μια πρόκληση για τον καθαρισμό των μακριών πεπτιδίων από την HPLC. Αμυλοειδές σειρές της διαδικασίας καθαρισμού πολυπεπτιδίων, απορροφώντας πολλή εμπειρία και χρησιμοποιείται με επιτυχία στον καθαρισμό του μακρού πεπτιδίου. Με την υιοθέτηση νέου εξοπλισμού, την ανάμειξη πολλαπλών συστημάτων καθαρισμού, τον επαναλαμβανόμενο διαχωρισμό και άλλες μεθόδους εμπειρίας, βελτιώθηκε σημαντικά το ποσοστό επιτυχίας του μακρού πεπτιδικού καθαρισμού.
Χρόνος δημοσίευσης: 2025-07-03