Φόντο
Το Melanotan I, επίσης γνωστό ως Afamelanotide, είναι ένα γραμμικό πολυπεπτίδιο που αποτελείται από 13 αμινοξέα που είναι έτοιμο να παίξει έναν ολοένα και πιο σημαντικό ρόλο στη φαρμακευτική έρευνα. Τα κύρια αγγλικά ονόματα για το Melanotan I είναι Melanotan-1 και Afamelanotide. Ως συνθετικό ανάλογο της ορμόνης α-μελανοκυττάρων α-MSH), το Melanotan I μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία διαταραχών φωτοευαισθησίας που προκαλούνται από ερυθροποιητική πρωτοπορφυρία. Επί του παρόντος, τα περισσότερα προϊόντα Melanotan I φέρουν ετικέτα μόνο για ερευνητική χρήση και δεν προορίζονται ακόμη για ανθρώπινη εφαρμογή. Στην παραδοσιακή σύνθεση στερεάς φάσης, η επιλογή της ρητίνης επηρεάζει σημαντικά την απόδοση σύζευξης και την τελική καθαρότητα του προϊόντος.
Βασικές πληροφορίες
Κινεζική ονομασία: Melanotan 1
Αγγλικό όνομα: Melanotan-1
Αριθμός εταιρείας: GT-A006
Αρ. CAS: 75921-69-6
Ακολουθία: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Μοριακός Τύπος: C78H111N21O19
Μοριακό Βάρος: 1646,88
Μέθοδος προετοιμασίας
ΕΓΩ. Παρασκευή Ρητίνης Fmoc-Val-Amino
Βήμα 1:Ζυγίστε 11,11 g (5 mmol) ρητίνης Ramage Amide AM με βαθμό υποκατάστασης 0,45 mmol/g και προσθέστε το σε έναν αντιδραστήρα στερεάς φάσης. Προσθέστε DCM για να διογκωθεί η ρητίνη για 30 λεπτά και μετά στραγγίστε. Πλύνετε τρεις φορές με DMF. Προσθέστε ένα διάλυμα DMF που περιέχει 20% πιπεριδίνη (v/v) και αντιδράστε για 5 λεπτά. Προσθέστε άλλο ένα διάλυμα πιπεριδίνης DMF 20% και αντιδράστε για 10 λεπτά, με μία πλύση DMF ενδιάμεσα. Αφού ολοκληρωθεί η αντίδραση, στραγγίστε και πλύνετε τρεις φορές με DMF.
Βήμα 2:Διαλύονται 5,09 g Fmoc-Val-OH, 2,02 g HOBT (1-υδροξυβενζοτριαζόλη) και 2,32 ml DIC (Ν,Ν'-διισοπροπυλκαρβοδιιμίδιο) σε DMF στους 0°C. Μετά από πλήρη διάλυση, προσθέστε το μίγμα στη στήλη αντίδρασης και αντιδράστε σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Παρακολουθήστε την πρόοδο της αντίδρασης χρησιμοποιώντας τη δοκιμή νινυδρίνης, διασφαλίζοντας αρνητικό αποτέλεσμα. Αφού ολοκληρωθεί η αντίδραση, πλύνετε τρεις φορές με DMF για να λάβετε ρητίνη Fmoc-Val-αμινο.
II. Παρασκευή Πλήρως Προστατευμένου Πεπτιδίου Ρητίνης Melanotan I.
Βήμα 1:Προσθέστε 20% πιπεριδίνη σε διάλυμα DMF (αναλογία όγκου) στην παραπάνω Fmoc-Val-αμινορεσίνη. Αντιδράστε για 5 λεπτά, στη συνέχεια προσθέστε ένα άλλο μέρος πιπεριδίνης 20% σε διάλυμα DMF και αντιδράστε για 10 λεπτά. Πλύνετε μία φορά με DMF κατά τη διάρκεια του διαστήματος. Αφού ολοκληρωθεί η αντίδραση, στεγνώστε υπό κενό και πλύνετε τρεις φορές με DMF.
Βήμα 2:Διαλύονται 5,06 g Fmoc-Pro-OH, 2,02 g HOBT (1-υδροξυβενζοτριαζόλη) και 2,32 ml DIC (Ν,Ν'-διισοπροπυλκαρβοδιιμίδιο) σε DMF στους 0°C. Μετά από πλήρη διάλυση, προσθέστε το μίγμα στη στήλη αντίδρασης και αντιδράστε σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Παρακολουθήστε την πρόοδο της αντίδρασης χρησιμοποιώντας τη δοκιμή νινυδρίνης (δοκιμή Kaiser) μέχρι να ληφθούν αρνητικά αποτελέσματα. Μετά την ολοκλήρωση, πλύνετε τρεις φορές με DMF για να λάβετε Fmoc-Pro-Val-aminoresin.
Βήμα 3:Ακολουθώντας τη μέθοδο που περιγράφεται στο Βήμα 2, συζεύξτε διαδοχικά κάθε αμινοξύ σύμφωνα με την αλληλουχία του Melanotan I. Μετά την ολοκλήρωση της αντίδρασης σύζευξης Ac-Ser(tBu)-OH, πλύνετε τρεις φορές με DMF, τρεις φορές με DCM (διχλωρομεθάνιο) και τρεις φορές με μεθανόλη. Στεγνώστε υπό κενό για να λάβετε 23,89 g πλήρως προστατευμένου πεπτιδίου Melanotan I που συνδέεται με τη ρητίνη.
III. Παρασκευή ακατέργαστου πεπτιδίου Melanotan I
23,89 g πλήρως προστατευμένου πεπτιδίου με ρητίνη Melanotan I τοποθετήθηκαν σε φιάλη με στρογγυλό πυθμένα. Στους 0°C, 250 ml ενός προπαρασκευασμένου κοκτέιλ διάσπασης (που αποτελείται από TFA:θειοανισόλη:φαινόλη:τριισοπροπυλσιλάνιο:νερό = 82,5:7,5:5:3:2 κατ' όγκο) προστέθηκαν αργά υπό ανάδευση. Το μίγμα αντέδρασε σε χαμηλή θερμοκρασία για 0,5 ώρες, ακολουθούμενη από αντίδραση σε θερμοκρασία δωματίου για 2 ώρες. Το διάλυμα διάσπασης στη συνέχεια διηθήθηκε υπό κενό. Αυτό το διάλυμα προστέθηκε αργά σε 2 L παγωμένου ανύδρου διαιθυλαιθέρα υπό ανάδευση. Το ακατέργαστο πεπτίδιο απομονώθηκε με διήθηση, πλύθηκε τρεις φορές με παγωμένο διαιθυλαιθέρα και ελήφθησαν 8,55 g ακατέργαστου πεπτιδίου Melanotan Ι.
IV. Παρασκευή του καθαρισμένου πεπτιδίου Melanotan I
Βήμα 1:Διαλύστε το ακατέργαστο πεπτίδιο Melanotan I σε 100 ml καθαρού νερού και διηθήστε μέσω μεμβράνης 0,45 μm για να ληφθεί ένα ακατέργαστο διάλυμα πεπτιδίου.
Βήμα 2:Καθαρίστε το ακατέργαστο πεπτίδιο Melanotan I χρησιμοποιώντας υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC). Χρησιμοποιήστε μια στήλη δυναμικής αξονικής συμπίεσης DAC-HB50 με κινητή φάση Α (0,05% υδατικό διάλυμα τριφθοροξικού οξέος) και κινητή φάση Β (0,05% τριφθοροξικό οξύ σε ακετονιτρίλιο). Εκτελέστε βαθμιδωτή έκλουση για διαχωρισμό και καθαρισμό. Ανιχνεύστε το δείγμα χρησιμοποιώντας έναν ανιχνευτή UV και συλλέξτε το διάλυμα πεπτιδίου που αντιστοιχεί στην κορυφή στόχο σε κλάσματα.
Βήμα 3:Μετά τον καθαρισμό με HPLC, λάβετε 180 ml διαλύματος τριφθοροξικού Melanotan I με καθαρότητα άνω του 99%. Συμπυκνώστε το διάλυμα στα 50 ml με περιστροφική εξάτμιση.
Βήμα 4:Εξισορροπήστε τη στήλη χρωματογραφίας με απιονισμένο νερό και φορτώστε 50 ml του καθαρισμένου διαλύματος τριφθοροοξικού Melanotan I (καθαρότητα >99%). Έκλουση για 50 λεπτά σε σύστημα υδατικού διαλύματος οξικού οξέος 2%. Συμπυκνώστε το συλλεγμένο προϊόν στόχο στα 80 ml με περιστροφική εξάτμιση. Εκτελέστε προκαταψυκτική ξήρανση και ξήρανση με κατάψυξη για να λάβετε τελικά 5,33 g καθαρισμένου πεπτιδίου Melanotan I, με απόδοση 32,33%.
Ώρα δημοσίευσης: 2026-01-05