Η τροποποίηση της φωσφορυλίωσης διαδραματίζει καθοριστικό ρόλο στη ζωή των κυττάρων και επηρεάζει πολλαπλές πτυχές. Η φωσφορυλίωση των πρωτεϊνών σχετίζεται στενά με διάφορες βιολογικές διεργασίες, όπως η επισκευή βλάβης του DNA, η μεταγραφική ρύθμιση, η μεταγωγή σήματος και η ρύθμιση της απόπτωσης των κυττάρων. Η μελέτη των φωσφορυλιωμένων πρωτεϊνών και των πεπτιδίων συμβάλλει στην αποκάλυψη των μηχανισμών αυτών των διαδικασιών και να εμβαθύνουμε την κατανόησή μας για την ουσία των δραστηριοτήτων της ζωής. Η βιοτεχνολογία της πεπτιδίου Χονγκ διαθέτει ώριμη τεχνολογία επισήμανσης πεπτιδίων φωσφορυλίωσης. Αξιοποιώντας τα δικά της πλεονεκτήματα τεχνολογικής και πρώτης ύλης, μπορούμε να συνθέσουμε πεπτίδια που περιέχουν φωσφορυλιωμένη σερίνη (PSER), φωσφορυλιωμένη θρεονίνη (PTHR) και φωσφορυλιωμένη τυροσίνη (PTYR) και παρέχουν υψηλής ποιότητας πεπτίδια με ένα έως πέντε θέσεις φωσφορυλίωσης.
Επισκόπηση της τεχνολογίας σήμανσης φωσφορυλίωσης:
Τα φωσφορυλιωμένα πεπτίδια αναφέρονται κυρίως στις υδροξυλικές ομάδες πλευρικής αλυσίδας της σερίνης (SER), της τυροσίνης (Tyr) και των υπολειμμάτων θρεονίνης (THR) στην πεπτιδική αλυσίδα που τροποποιούνται σε όξινες φωσφορικές εστέρες. Τα φωσφορυλιωμένα πεπτίδια παίζουν καθοριστικό ρόλο στη μελέτη της φωσφορυλίωσης πρωτεϊνών. Ως εκ τούτου, είναι ιδιαίτερα σημαντικό να διερευνηθούν βαθιά οι αντιδράσεις φωσφορυλίωσης των πρωτεϊνών και των πεπτιδίων και να βρεθούν ώριμες και απλές συνθετικές μεθόδους.
Επί του παρόντος, οι μέθοδοι για την τροποποίηση των πεπτιδίων της φωσφορυλίωσης εμπίπτουν κυρίως σε δύο κατηγορίες:
(1) Ενσωματώστε άμεσα τα κατάλληλα προστατευμένα φωσφορυλιωμένα αμινοξέα στην αλληλουχία πεπτιδίων:
Πρώτον, τα αμινοξέα που πρέπει να φωσφορυλιώνονται (όπως THR, SER ή TYR) υποβάλλονται σε θεραπεία φωσφορυλίωσης και προστατεύονται κατάλληλα. Στη συνέχεια, ακολουθώντας τη συμβατική διαδικασία σύνθεσης πεπτιδίων στερεάς φάσης (SPPS), τα φωσφορυλιωμένα μονομερή συνδέονται με τις συγκεκριμένες θέσεις του πολυπεπτιδίου. Αυτή η μέθοδος είναι απλή στη λειτουργία και έχει γίνει μία από τις κύριες τεχνικές για την τροποποίηση των πεπτιδίων σημείων.
(2) Μετά τη σύνθεση της πολυπεπτιδικής αλληλουχίας στην ρητίνη, οι υδροξυλικές ομάδες πλευρικής αλυσίδας των Ser, Tyr ή THR φωσφορυλιώνονται:
Κατά την εκτέλεση τροποποίησης φωσφορυλίωσης, εάν υιοθετείται η μέθοδος άμεσης συμπύκνωσης των φωσφορυλιωμένων μονομερών στο πολυπεπτίδιο, το φωσφορυλιωμένο αμινοξύ, λόγω της μεγαλύτερης πλευρικής αλυσίδας του, προκαλεί αύξηση της στερεοχημικής παρεμπόδισης, καθιστώντας δύσκολη τη συμπύκνωση με την πεπτιδική αλυσίδα. Επιπλέον, η εισαγωγή επακόλουθων αμινοξέων θα γίνει επίσης σχετικά περίπλοκη, ειδικά όταν υπάρχουν πολλαπλές θέσεις φωσφορυλίωσης. Η διαδικασία σύνθεσης θα είναι εξαιρετικά δύσκολη και το τελικό προϊόν θα είναι πολύ περίπλοκο, καθιστώντας δύσκολη τη διαχωρισμό και την απόδοση εξαιρετικά χαμηλή. Επομένως, όταν υπάρχουν πολλαπλές θέσεις που απαιτούν φωσφορυλίωση στην πολυπεπτιδική αλυσίδα, μπορεί να θεωρηθεί ότι ολοκληρώνεται πρώτα η σύνθεση της πολυπεπτιδικής αλληλουχίας στην ρητίνη και στη συνέχεια φωσφορυλιώνεται τις υδροξυλικές ομάδες της πλευρικής αλυσίδας των Ser, Tyr ή THR. Κατά τη διάρκεια αυτής της διαδικασίας, πρώτα αφαιρέστε επιλεκτικά τις ομάδες προστασίας της πλευρικής αλυσίδας του αμινοξέος που πρέπει να επισημανθεί. Για το Tyr και το THR, τα απροστάτευτα αμινοξέα των πλευρικών αλυσίδων τους μπορούν να αντιδράσουν άμεσα. Οι ομάδες προστασίας της πλευρικής αλυσίδας μπορούν να απομακρυνθούν ποσοτικά υπό την κατάσταση 1% TFA/DCM. Σε αυτή τη μέθοδο, το ενεργό ενδιάμεσο δισυζυλ φωσφοραμιδίων και η τετραζόλη μπορεί να δημιουργηθεί από την αντίδραση με την τελευταία και μπορεί να συνδεθεί με την ομάδα υδροξυλίου. Στη συνέχεια, μπορεί να πραγματοποιηθεί μια αντίδραση οξείδωσης υπό συνθήκες υπεροξειδίου για να δημιουργηθεί η ομάδα φωσφονυλίου, ολοκληρώνοντας τη φωσφορυλίωση.
Χρόνος δημοσίευσης: 2025-07-16