Μερικές ερωτήσεις και απαντήσεις σχετικά με τη διαλυτότητα των τροποποιημένων πεπτιδίων

1. Ποιες ακαθαρσίες υπάρχουν στα μη καθαρισμένα με HPLC;

Α: Τροποποιημένες πεπτιδικές και μη τροποποιημένες πεπτιδικές ακαθαρσίες σε ακατέργαστο και αφαλατωμένο τροποποιημένο πεπτίδιο: όπως μη τροποποιημένο πεπτίδιο μη μήκους και μερικές πρώτες ύλες όπως DTT, TFA κ.λπ.

2. Ποιες ακαθαρσίες καθαρίζονται από το HPLC;

Α: Το τροποποιημένο πεπτίδιο που καθαρίστηκε από το HPLC θα έχει ακόμα πολλές ακαθαρσίες και οι ακαθαρσίες είναι συνήθως μικρά πεπτίδια και λίγο TFA.

3. Πόσο καιρό είναι κατάλληλο;

Α: Η σύνθεση τροποποιημένου πεπτιδίου πρέπει να εξετάσει το μήκος του τροποποιημένου πεπτιδίου, του φορτίου, της υδροφιλικότητας και της υδροφοβικότητας και άλλων παραγόντων. Όσο περισσότερο είναι το συνολικό μήκος, τόσο χαμηλότερη είναι η καθαρότητα και η απόδοση του ακατέργαστου προϊόντος και τόσο υψηλότερη είναι η δυσκολία του καθαρισμού και η πιθανότητα δυσκολίας στη σύνθεση. Ωστόσο, δεν υπάρχει τρόπος να αλλάξετε την αλληλουχία του λειτουργικού τομέα του τροποποιημένου πεπτιδίου, αλλά προκειμένου να ολοκληρωθεί η σύνθεση του τροποποιημένου πεπτιδίου, μερικές φορές μόνο μερικά βοηθητικά αμινοξέα μπορούν να προστεθούν στην ανάντη και κατάντη της λειτουργικής περιοχής για να βελτιωθεί η διαλυτότητα και η υδροφοβικότητα του τροποποιημένου πεπτιδίου. Εάν το τροποποιημένο πεπτίδιο είναι πολύ μικρό, μπορεί να υπάρχουν προβλήματα στη σύνθεση. Το πρώτο πρόβλημα είναι ότι το συνθετικό τροποποιημένο πεπτίδιο έχει ορισμένες δυσκολίες στη διαδικασία μετά την επεξεργασία. Το τροποποιημένο πεπτίδιο εντός 5 πεπτιδίων συνήθως έχει υδρόφοβα αμινοξέα, διαφορετικά η μετα-επεξεργασία είναι δύσκολη. Τα τροποποιημένα πεπτίδια κάτω από 15 υπολείμματα αμινοξέων μπορούν γενικά να ληφθούν με ικανοποιητική απόδοση και απόδοση.

Μερικές ερωτήσεις και απαντήσεις σχετικά με τη διαλυτότητα των τροποποιημένων πεπτιδίων

4. Πώς να κρίνετε τη διαλυτότητα του τροποποιημένου πεπτιδίου από την αλληλουχία;

(1) Το τροποποιημένο πεπτίδιο που περιέχει υψηλό ποσοστό υδρόφοβων αμινοξέων όπως Leu, Val, IIE, MET, PHE και TRP δεν είναι εύκολα διαλυτή σε υδατικό διάλυμα ή σχεδόν αδιάλυτο. Αυτό το αμινοξύ μπορεί να είναι προβληματικό είτε σε καθαρισμό είτε σε σύνθεση.

(2) the proportion of hydrophobic amino acids under normal conditions < The proportion of charged amino acids can reach up to 20%. If the N or C of the modified peptide is short, the increase of polar amino acids can also improve the solubility.

5. Γιατί είναι δύσκολο να συνθέσουμε Cys, Met ή TRP;

Α: Τα τροποποιημένα πεπτίδια που περιέχουν Cys, MIT ή TRP δεν μπορούν να συντεθούν και τα προϊόντα υψηλής καθαρότητας είναι δύσκολο να ληφθούν. Αυτό οφείλεται κυρίως στο γεγονός ότι αυτές οι ομάδες είναι λιγότερο σταθερές και επιρρεπείς στην οξείδωση. Η χρήση και η αποθήκευση αυτών των τροποποιημένων πεπτιδίων απαιτεί ιδιαίτερη φροντίδα για να αποφευχθεί το επαναλαμβανόμενο άνοιγμα του καπακιού.

6, γιατί κάποια συνθετική απόδοση ή καθαρότητα θα είναι πολύ χαμηλή;

Α: Υπάρχει σημαντική διαφορά μεταξύ της σύνθεσης τροποποιημένων πεπτιδίων και της σύνθεσης των εκκινητών. Υπάρχουν πολύ λίγοι εκκινητές που δεν μπορούν να συντεθούν, αλλά υπάρχουν συχνά τροποποιημένα πεπτίδια που δεν μπορούν να συντεθούν. Όπως τα VAL, ILE, TYR και TRP, Leu, PHE, GLN και Thr αμινοξύ κοντά ή βρόχος, τα τροποποιημένα πεπτίδια δεν μπορούν να τεντωθούν στη διαδικασία σύνθεσης, η συνθετική απόδοση είναι χαμηλότερη. Η αποτελεσματικότητα της σύνθεσης και η καθαρότητα του προϊόντος είναι πολύ χαμηλή στις ακόλουθες περιπτώσεις, όπως: Repeat Pro, Ser-Ser, Repeat ASP, τέσσερα διαδοχικά gly, κλπ.

7. Πώς καθαρίζεται;

Α: Τα τροποποιημένα πεπτίδια καθαρίζονται γενικά με στήλη αντιστροφής φάσης (όπως C8, C18, κλπ.) Στα 214nm. Το σύστημα buffer είναι γενικά ένα διάλυμα που περιέχει TFA, ph2.0. Η Buffera περιείχε 0,1%TfainddH2O και η BufferB περιείχε 1%TFA/ACN/PH2.0. Διαλύθηκε σε Buffera πριν από τον καθαρισμό. Εάν η λύση δεν είναι ικανοποιητική, διαλύεται με bufferb, τότε αραιώστε με Buffera. Για πολύ υδρόφοβα τροποποιημένα πεπτίδια, προστίθεται μερικές φορές ένα μικρό μορφοποιητικό ή οξικό οξύ.