Μετά τη χημική σύνθεση των πεπτιδίων με FMOC στερεάς φάσης, υπάρχουν πολλές μέθοδοι διάσπασης και τώρα εισάγονται δύο βασικοί τύποι που χρησιμοποιούμε συνήθως.
1. Μέθοδος ισχυρού οξέος (TFA)
Η ξηρή ρητίνη τοποθετήθηκε σε μια φιάλη κούνου και προστέθηκε κατάλληλη ποσότητα σαρωτών. (Scavengers) Αντιδραστήριο κοπής τριφθοροξικού οξέος (TFA), 10-25ml/g ρητίνη, κάλυψη και κλονισμένο διαλείπουσα σε θερμοκρασία δωματίου με περιστροφή. Η ρητίνη αποστραγγίστηκε, πλύθηκε 2-3 φορές με νέο TFA, το διήθημα συνδυάστηκε και 8-10 φορές ο όγκος του πάγου διαιθυλαιθέρα έπεσε. Μερικές φορές, κάποια TFA μπορούν να ατμηθούν για να αποκτήσουν ακατέργαστα πεπτιδικά ιζήματα. Ο αιθέρας μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αύξηση της αποτελεσματικότητας των βροχοπτώσεων με ψύξη με παγωμένη. Τέλος, συλλέχθηκε το κατακρημνισμένο προϊόν ακατέργαστου πεπτιδίου.
Κατάλληλη ρητίνη: ρητίνη Wang ή Rink Amide Resin
2, Μέθοδος ασθενούς οξέος (TFA ή αραίωση οξικού οξέος) 1% TFA:
1g πεπτιδίων που περιέχουν ρητίνη προστέθηκαν σε μια φιάλη γυαλιού κούνημα διαλύματος διχλωρομεθανίου που περιείχε 1%TFA, σφραγισμένο και κλονισμένο για 2 λεπτά. Το διήθημα πιέστηκε με άζωτο σε μια άλλη νέα φιάλη κούνου μεθανόλης που περιείχε 10% πυριδίνη και η διαδικασία επαναλήφθηκε 10 φορές. Τα προστατευτικά πεπτίδια που παραμένουν στη ρητίνη πλύθηκαν τρεις φορές χρησιμοποιώντας 30ml DCM και 30ml MeOH. Τα υπολείμματα ελέγχθηκαν και καθαρίστηκαν από TLC ή HPLC. Όλα τα διηθήματα συνδυάστηκαν και το 5% του διαλύτη μαγειρεύτηκε υπό μειωμένη πίεση. Προστέθηκαν σαράντα ml νερού και η βροχόπτωση με βοήθησε με το μίγμα ψύξης. Μετά τη διήθηση, το προϊόν πλύθηκε τρεις φορές με καθαρό νερό, τοποθετημένο σε φούρνο ξήρανσης κενού και ξηράνθηκε με KOH ή P2O5.
Αραιωμένο οξικό οξύ:
Τα πεπτίδια κρεμασμένα στη ρητίνη υποβλήθηκαν σε αγωγή με διάλυμα κοπής για 2 ώρες χρησιμοποιώντας ACOH // TFE/DCM (2: 2: 6), η ρητίνη διηθήθηκε και η ρητίνη πλύθηκε τρεις φορές με διάλυμα κοπής. Η περίσσεια οξικού οξέος απομακρύνθηκε με την προσθήκη 15-πλάσματος Ν-εξάνιο στο μικτό διήθημα και το περιστροφικό στύλο.
Ρητίνη εφαρμογής: ρητίνη 2-CTC
Χρόνος δημοσίευσης: 2025-07-01