Ο καθαρισμός της πρωτεΐνης είναι η διαδικασία διαχωρισμού των πρωτεϊνικών κλασμάτων ενός συγκεκριμένου σκοπού από τους ιστούς, τα κύτταρα ή τα μείγματα πρωτεϊνών. Ο καθαρισμός της πρωτεΐνης δεν πρέπει να προάγει μόνο μια ισχυρή καθαρότητα της απομονωμένης πρωτεΐνης, αλλά και να διατηρεί τη βιολογική δραστικότητα της πρωτεΐνης. Ως εκ τούτου, είναι απαραίτητο να σχεδιάσουμε ένα ή περισσότερα σχήματα καθαρισμού συνδυασμού σύμφωνα με διαφορετικές πρωτεϊνικές ιδιότητες. Η κύρια στρατηγική για τον καθαρισμό των πρωτεϊνών είναι να εκμεταλλευτεί τις ομοιότητες και τις διαφορές μεταξύ διαφορετικών πρωτεϊνών. Με βάση την ομοιότητα μεταξύ των πρωτεϊνών, μπορεί να απομακρυνθεί το μη πρωτεϊνικό υλικό και στη συνέχεια η πρωτεΐνη στόχου μπορεί να διαχωριστεί με βάση τις διαφορές πρωτεϊνών. Ειδικά με την ταχεία ανάπτυξη της τεχνολογίας γενετικής μηχανικής, αν και πολλές πρωτεΐνες εκφράζονται με γενετικό ανασυνδυασμό, το επίπεδο καθαρισμού πρωτεΐνης σχετίζεται άμεσα με την καθαρότητα και τη δραστηριότητα της πρωτεΐνης. Ως εκ τούτου, ο καθαρισμός των πρωτεϊνών παραμένει ένα σημαντικό θέμα στη σύγχρονη βιοτεχνολογία.
Σκοπός
Από τη μία πλευρά, η απομόνωση και ο καθαρισμός των πρωτεϊνών είναι ιδιαίτερα σημαντικοί για την εις βάθος μελέτη της δομής και της λειτουργίας των πρωτεϊνών και από την άλλη πλευρά ο διαχωρισμός και ο καθαρισμός των πρωτεϊνών σχετίζονται επίσης άμεσα με την επίδραση της εφαρμογής των πρωτεϊνών. Ως εκ τούτου, ο καθαρισμός των πρωτεϊνών διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην έρευνα και την εφαρμογή της βιολογικής επιστήμης και η τεχνολογία διαχωρισμού και καθαρισμού πρωτεϊνών αποτελεί επίσης βασική τεχνολογία στον βιολογικό κλάδο.
Ο τρόπος
Η αρχή του καθαρισμού των πρωτεϊνών είναι να διαχωριστεί η πρωτεΐνη -στόχος με λογική αποτελεσματικότητα, ρυθμό, απόδοση και καθαρότητα διατηρώντας παράλληλα τη βιολογική της δραστηριότητα και την χημική ακεραιότητα. Τα κύρια βήματα περιλαμβάνουν την επιλογή πειραματικών υλικών, προεπεξεργασία, εκχύλιση πρωτεΐνης, ταξινόμηση ακατέργαστων πρωτεϊνών, ταξινόμηση λεπτών πρωτεϊνών και ταυτοποίηση πρωτεϊνών.
Η διαδικασία καθαρισμού πρέπει να δώσει προσοχή: 1 για να ελαχιστοποιηθεί η επίδραση στη δραστηριότητα της πρωτεΐνης, όπως για να αποφευχθεί πολύ υψηλό ή πολύ χαμηλό ρΗ, υψηλή θερμοκρασία και βαριά αποτελέσματα. 2. Λειτουργούν σε χαμηλή θερμοκρασία. 3. Προσπαθήστε να διατηρήσετε το κύριο επίπεδο περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες στο δείγμα.
Ταξινόμηση του
Ο καθαρισμός πρωτεΐνης μπορεί να ταξινομηθεί σύμφωνα με τον τύπο της μεθόδου καθαρισμού:
I. Μέθοδος κατακρήμνισης, συμπεριλαμβανομένης της εναπόθεσης αλατιού, χρησιμοποιώντας ιόντα άλατος για να καταστρέψει το στερεοποιημένο στρώμα στην επιφάνεια της πρωτεΐνης, εκθέτοντας την υδρόφοβη περιοχή και στη συνέχεια την εναπόθεση για να επιτευχθεί ο σκοπός του προκαταρκτικού καθαρισμού. Η οργανική εναπόθεση, χρησιμοποιώντας οργανικούς διαλύτες για τη μείωση της δραστικότητας του νερού, καταστρέφει το πηκτωμένο φιλμ στην επιφάνεια της πρωτεΐνης, οδηγώντας σε καθίζηση πρωτεΐνης. Η κατακρήμνιση είναι μια μέθοδος ήπιο καθαρισμό, αλλά η καθαρότητα δεν είναι υψηλή και μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως πρωταρχική διαδικασία καθαρισμού.
Δύο μέθοδος αιμοκάθαρσης, συμπεριλαμβανομένης της μεθόδου αιμοκάθαρσης και της μεθόδου υπερδιήθησης. Με αιμοκάθαρση και υπερδιήθηση, μπορούν να εξαλειφθούν οι μικρές μοριακές ακαθαρσίες και το πρωτεϊνικό διάλυμα μπορεί επίσης να αντικατασταθεί.
3. Οι χρωματογραφικές μέθοδοι περιλαμβάνουν χρωματογραφία μοριακού κόσκινα πηκτώματα, χρωματογραφία ανταλλαγής ιόντων, χρωματογραφία συγγένειας (χρωματογραφία χρωματογραφίας με μεταλλική χηλική, χρωματογραφία πρωτεΐνης Α/g, πρωτεΐνη υποδοχέα, υπόστρωμα κλπ.) Προκειμένου να επιτευχθούν καλύτερα αποτελέσματα, απαιτείται συχνά ένας συνδυασμός δύο χρωματογραφικών μεθόδων, όπως η χρωματογραφία συγγένειας και η χρωματογραφία ανταλλαγής ιόντων.
Εκτός από τις παραπάνω μεθόδους, υπάρχουν πολλές άλλες μεθόδους καθαρισμού, όπως η φυγοκέντρηση κλίσης πυκνότητας, οι οποίες είναι κατάλληλες για την παραγωγή πρωτεϊνών υψηλής καθαρότητας, αλλά απαιτούν υψηλότερες πειραματικές συνθήκες. Οι κρύσταλλοι πρωτεΐνης είναι κατάλληλοι για ανάλυση βιολογικής δομής, όπως η μεταφορά Χ.
Χρόνος δημοσίευσης: 2025-07-01