Στη βιολογική έρευνα, συνήθως χρησιμοποιούνται πολυπεπτίδια με μακρά αλληλουχία.Για πεπτίδια με περισσότερα από 60 αμινοξέα στην αλληλουχία, χρησιμοποιούνται γενικά έκφραση γονιδίου και SDS-PAGE για τη λήψη τους.Ωστόσο, αυτή η μέθοδος διαρκεί πολύ και το αποτέλεσμα διαχωρισμού του τελικού προϊόντος δεν είναι καλό.
Προκλήσεις και λύσεις για μακροχρόνια σύνθεση πεπτιδίων
Στη σύνθεση μακριών πεπτιδίων, αντιμετωπίζουμε πάντα ένα πρόβλημα, δηλαδή, η στερική παρεμπόδιση της αντίδρασης συμπύκνωσης αυξάνεται με την αύξηση της αλληλουχίας στη σύνθεση και ο χρόνος αντίδρασης πρέπει να προσαρμοστεί για να ολοκληρωθεί η αντίδραση.Ωστόσο, όσο μεγαλύτερος είναι ο χρόνος αντίδρασης, τόσο περισσότερες παρενέργειες παράγονται και σχηματίζεται ένα τμήμα του πεπτιδίου στόχου.Τέτοια υπολείμματα - οι ελλιπείς πεπτιδικές αλυσίδες είναι βασικές ακαθαρσίες που παράγονται στη σύνθεση μακριών πεπτιδίων.Επομένως, στη σύνθεση του μακρού πεπτιδίου, το βασικό πρόβλημα που πρέπει να ξεπεράσουμε είναι να διερευνήσουμε τις υψηλής ποιότητας συνθήκες αντίδρασης και μεθόδους αντίδρασης, έτσι ώστε να κάνουμε την αντίδραση συμπύκνωσης αμινοξέων πιο ολοκληρωμένη και πλήρη.Επιπλέον, μειώστε τον χρόνο αντίδρασης, γιατί όσο μεγαλύτερος είναι ο χρόνος αντίδρασης, τόσο πιο ανεξέλεγκτες παράπλευρες αντιδράσεις, τόσο πιο πολύπλοκα είναι τα παραπροϊόντα.Επομένως, συνοψίζονται τα ακόλουθα τρία σημεία:
Η σύνθεση μικροκυμάτων μπορεί να χρησιμοποιηθεί: Για ορισμένα αμινοξέα που συναντώνται στη διαδικασία σύνθεσης και τα οποία δεν είναι εύκολο να ενσωματωθούν, μπορεί να χρησιμοποιηθεί σύνθεση μικροκυμάτων.Αυτή η μέθοδος έχει αξιοσημείωτα αποτελέσματα και μειώνει σημαντικά τον χρόνο αντίδρασης και μειώνει τον σχηματισμό δύο βασικών παραπροϊόντων.
Μπορεί να χρησιμοποιηθεί μέθοδος σύνθεσης θραυσμάτων: Όταν ορισμένα πεπτίδια είναι δύσκολο να συντεθούν με κοινές μεθόδους σύνθεσης και δεν είναι εύκολο να καθαριστούν, μπορούμε να υιοθετήσουμε ολόκληρη τη συμπύκνωση αρκετών αμινοξέων σε ένα συγκεκριμένο τμήμα του πεπτιδίου στην πεπτιδική αλυσίδα ως σύνολο.Αυτή η μέθοδος μπορεί επίσης να λύσει πολλά προβλήματα στη σύνθεση.
Μπορεί να χρησιμοποιηθεί σύνθεση ακυλυδραζιδίου: Η σύνθεση πεπτιδίων ακυλυδραζιδίου είναι μια μέθοδος σύνθεσης στερεάς φάσης του Ν-τερματικού πεπτιδίου Cys και του C-τερματικού πολυπεπτιδίου υδραζιδίου χημική εκλεκτική αντίδραση μεταξύ του σχηματισμού δεσμών αμιδίου για την επίτευξη της μεθόδου πεπτιδικής σύνδεσης.Με βάση τη θέση του Cys στην πεπτιδική αλυσίδα, αυτή η μέθοδος διαιρεί ολόκληρη την πεπτιδική αλυσίδα σε πολλαπλές αλληλουχίες και τις συνθέτει αντίστοιχα.Τέλος, το πεπτίδιο στόχος λαμβάνεται μέσω αντίδρασης συμπύκνωσης υγρής φάσης.Αυτή η μέθοδος όχι μόνο μειώνει σημαντικά τον χρόνο σύνθεσης του μακρού πεπτιδίου, αλλά αυξάνει επίσης σημαντικά την καθαρότητα του τελικού προϊόντος.
Μακρύς καθαρισμός πεπτιδίου
Η ιδιαιτερότητα των μακριών πεπτιδίων οδηγεί αναπόφευκτα σε πολύπλοκα συστατικά ακατέργαστων πεπτιδίων.Ως εκ τούτου, είναι επίσης μια πρόκληση ο καθαρισμός μακριών πεπτιδίων με HPLC.σειρά αμυλοειδούς διαδικασίας καθαρισμού πολυπεπτιδίου, που απορροφά μεγάλη εμπειρία και χρησιμοποιείται με επιτυχία στον καθαρισμό μακρού πεπτιδίου.Με την υιοθέτηση νέου εξοπλισμού, την ανάμειξη πολλαπλών συστημάτων καθαρισμού, τον επαναλαμβανόμενο διαχωρισμό και άλλες μεθόδους εμπειρίας, το ποσοστό επιτυχίας του μακροχρόνιου καθαρισμού πεπτιδίου βελτιώθηκε σημαντικά.
Ώρα δημοσίευσης: Απρ-18-2023