Τα ανασυνδυασμένα πρωτεϊνικά αντιγόνα έχουν συχνά αρκετούς διαφορετικούς επιτόπους, μερικοί από τους οποίους είναι επίτοποι αλληλουχίας και άλλοι είναι δομικοί επίτοποι.Τα πολυκλωνικά αντισώματα που λαμβάνονται με ανοσοποίηση ζώων με μετουσιωμένα αντιγόνα είναι μείγματα αντισωμάτων ειδικά για μεμονωμένους επίτοπους και μπορούν να χρησιμοποιηθούν γενικά για την ανίχνευση φυσικών δομών ή μετουσιωμένων πρωτεϊνών-στόχων.Ένα παρενέργεια από τη χρήση μετουσιωμένων πρωτεϊνών ως ανοσογόνων είναι ότι οι μετουσιωμένες πρωτεΐνες τείνουν να είναι πιο ανοσογόνες και μπορούν να διεγείρουν μια ισχυρή ανοσολογική απόκριση στα ζώα.
Το σύστημα έκφρασης της Escherichia coli επιλέγεται συνήθως για αντιγονικούς σκοπούς επειδή είναι το πιο δαπανηρό σύστημα από άποψη χρόνου και χρήματος.Προκειμένου να βελτιωθεί η δυνατότητα έκφρασης της πρωτεΐνης στόχου και η ευκολία του καθαρισμού, μερικές φορές εκφράζεται μόνο ένα μικρό θραύσμα της πρωτεΐνης στόχου, όπως μια συγκεκριμένη περιοχή.
Η τρισδιάστατη δομή των πρωτεϊνών
Ο συγκεκριμένος τομέας μιας πρωτεΐνης
Εάν ο σκοπός της παρασκευής αντισωμάτων είναι αποκλειστικά η ανίχνευση wb, είναι οικονομικό και γρήγορο να χρησιμοποιηθεί συνθετικό μικρό πεπτίδιο ως αντιγόνο, αλλά υπάρχει κίνδυνος ασθενής ανοσογονικότητας ή μη αναγεννητικότητας λόγω ακατάλληλης επιλογής πεπτιδικού τμήματος.Εφόσον η παρασκευή αντισωμάτων απαιτεί μεγάλη περίοδο, δύο ή τρία διαφορετικά πεπτιδικά τμήματα επιλέγονται συχνά για την παρασκευή αντισωμάτων χρησιμοποιώντας πολυπεπτιδικό αντιγόνο για να διασφαλιστεί το ποσοστό επιτυχίας του πειράματος.
Η καθαρότητα του πολυπεπτιδικού αντιγόνου για ανοσοποίηση απαιτείται να είναι μεγαλύτερη από 80%.Αν και μια υψηλότερη καθαρότητα μπορεί θεωρητικά να αποκτήσει αντισώματα με καλύτερη εξειδίκευση, στην πράξη, τα ζώα παράγουν πάντα μεγάλο αριθμό μη ειδικών αντισωμάτων, καλύπτοντας έτσι τα οφέλη της καθαρότητας του αντιγόνου.
Επιπλέον, η παρασκευή αντισωμάτων από μικρά πεπτίδια πρέπει να διασταυρωθεί με το κατάλληλο αντιγόνο φορέα για να ενισχυθεί η ανοσογονικότητά του.Δύο κοινοί αντιγονικοί φορείς είναι η KLH και η BSA.
Ώρα δημοσίευσης: Μαρ-23-2023